Características tintoriales de neisseria gonorrhoeae por la tinción diferencial de fluorescencia modificada | Staining characteristics of neisseria gonorrhoeae by modified differential fluorescent staining method

Resumen

Son pocas las técnicas de coloración de fluorescencia utilizadas en estudios del ciclo celular bacteriano, de manera que se evaluaron las características tintoriales de Neisseria gonorrhoeae con la tinción diferencial de fluorescencia modificada y la asociación con la presencia de ADN y ARN. El propósito del estudio fue aportar evidencias sobre el mecanismo de reacción de la tinción de fluorescencia modificada, así como la de ofrecer esta técnica como una herramienta complementaria en estudios del ciclo celular. A los aislamientos de N. gonorrhoeae se les realizó el ciclo celular transfiriendo un cultivo en crecimiento óptimo a un caldo BHI con 5% de sangre humana. Se tomaron alícuotas para realizar extendidos para la tinción, pre y post tratamiento con ADNasa y ARNasa a intervalos de 5 a 120 min, y se aplicó la prueba de McNemar para verificar la asociación de la reactividad tintorial antes y después del tratamiento enzimático. En el ciclo celular, la tinción de la bacteria fue predominante el anaranjado ligeramente fluorescente y la secuencia de color en el ciclo fue amarillo, anaranjado y verde. Las células que se tiñeron de anaranjado o amarillo, después del tratamiento enzimático, cambiaron a verdes ligeramente fluorescentes o verdes casi imperceptibles, existiendo asociación estadísticamente significativa (p < 0,05) entre el color amarillo y anaranjado ligeramente fluorescente o fluorescente con presencia de ADN y ARN. Se concluye que el ADN y ARN participan en el carácter tintorial amarillo y anaranjado ligeramente fluorescente o fluorescente del método de coloración diferencial de fluorescencia modificado en el ciclo celular de N. gonorrhoeae.

Palabras clave: Ciclo celular, ADN, ARN, ADNasa, ARNasa.

ABSTRACT

There are few fluorescent staining techniques used in studies of the bacterial cell cycle, so that the staining characteristics of Neisseria gonorrhoeae were analyzed by the modified differential fluorescent staining method and the association with the presence of DNA and RNA. The purpose of this study was to provide evidence on the reaction mechanism of modified differential fluorescent staining method, as well as offering the technique as a complementary tool in studies of the cell cycle. The cell cycle was evaluated in isolates of N. gonorrhoeae transferring a culture in optimal growth to BHI broth with 5% human blood. Aliquots were taken to prepare slide spreads for staining, before and after treatment with DNase and RNase at 5 to 120 min intervals, and the McNemar test was applied to verify the association of the staining reactivity before and after enzyme treatment. In the cell cycle, the bacteria staining was predominantly slightly fluorescent orange and the color sequence in the cycle was yellow, orange and green. Cells which stained orange or yellow, after the enzyme treatment, changed to slightly fluorescent green or almost imperceptible green, with statistically significant association (p < 0,05) between the yellow and orange slightly fluorescent or fluorescent with the presence of DNA and RNA. We conclude that DNA and RNA are involved in the yellow and orange dye by modified differential fluorescent staining method in the cell cycle of N. gonorrhoeae.

Key words: Cell cycle, DNA, RNA, DNase, RNase.