CUANTIFICACIÓN DE CAROTENOIDES TOTALES Y β-CAROTENO EN DOS CEPAS DE DUNALIELLA SALINA (CHLOROPHYTA, VOLVOCALES) AISLADAS DE LAGUNAS HIPERSALINAS DE VENEZUELA.

Resumen

RESUMEN: Dunaliella salina es una microalga que se caracteriza por soportar condiciones de cultivo extremas, ya que escapaz de producir ciertos compuestos orgánicos, como los carotenoides, que le confiere la capacidad de fotoprotección. Lassalinas de Araya y Coche representan zonas geográficas con potencial de explotación para el cultivo de esta microalga, porbrindar factores estresantes, como altas intensidades de luz y salinidad, entre otros; que son capaces de inducir la producción decarotenoides. Para el presente estudio se utilizaron como biomasa de partida, cultivos unialgales de D. salina, cepa Araya ycepa Coche, con densidades celulares conocidas, cultivadas bajo condiciones controladas de laboratorio (26ÚC, fotoperiodo12:12, iluminación de 10000 lux y aireación constante de 200 ml.min-1) y una salinidad de 200 UPS. Para la selección del mejorsistema de extracción de carotenoides totales se utilizaron tres mezclas de solventes (acetona/agua, acetona/metanol ytetrahidrofurano/etanol), en tres proporciones distintas (50/50, 70/30 y 90/10) y se evaluaron basándose en el contenido decarotenoides totales que éstas lograron extraer, resultando acetona/metanol 90/10 el mejor sistema de solventes, para ambascepas. La separación e identificación de los carotenoides totales y β-caroteno se realizó mediante cromatografía de capa fina,CCF, y cromatografía de columna, CC, lográndose agrupar las fracciones según los factores de reparto de cada eluato y comparación de los Rf con los de un patrón comercial de β-caroteno. El posterior análisis de las fracciones provenientes de laseparación por CC, mediante HPLC permitió cuantificar el contenido de β-caroteno presente en las mezclas de carotenoidestotales extraídos de cada cepa, resultando D. salina, cepa Coche, la mayor productora de β-caroteno (54,3%, con relación alcontenido de carotenoides totales).

Palabras clave: β-caroteno, carotenoides totales, CCF, CC, HPLC.
ABSTRACT: Dunaliella salina is a microalga which, due to its ability to produce photoprotective organic compoundssuch as carotenoids, is able to withstand extreme conditions. The salt beds of Araya and Coche, due to stress factors suchas high salinity and light intensity and other factors that induce carotenoid production, are potentially exploitable for thecultivation of this microalga. For this study, unialgal populations of both Coche and Araya strains of D. salina of known celldensity, cultivated under controlled laboratory conditions (26ÚÚC, photoperiod 12:12, illumination of 10,000 lux, constantaeration of 200 ml.min-1, and a salinity of 200 UPS) were used as the starter biomass. Three solvent mixtures (acetone/water, acetone/methanol, and tetrahydrofurane/ethanol) in three proportions (50:50, 70:30, and 90:10) were used to selectthe best system of total carotenoid extraction, acetone/methanol 90:10 resulting the most high-yielding solvent systemfor both strains. Separation and identification of total carotenoids and â-carotene was done using thin layer chromatography(TLC) and column chromatography (CC), grouping the samples according to each eluate, and comparing them to the Rf ofcommercial â-carotene. The subsequent analysis of the fractions from the CC separation allowed for quantification of theâ-carotene present in the total carotenoid content of each strain, Coche resulting the most high-yielding (54.3%).

Key words: â-carotene, total carotenoids, TLC, CC HPLC.