Características morfo-tintoriales en el ciclo celular de Acinetobacter baumannii por los métodos de Gram y 4’, 6-diamidino-2’-fenilindol, dihidrocloruro | Morphological and staining characteristics in cell cycle of Acinetobacter baumannii by the methods of Gram and 4´, 6-diamidino-2´-phenylindole, dihydrochloride

Resumen

Diversos estudios han reportado variaciones en la tinción bacteriana por Gram, infiriendo que están asociadas al contenido de los ácidos nucleicos en el ciclo celular bacteriano. Con el objeto de dar continuidad a los estudios microscópicos realizados referentes al ciclo celular bacteriano, se evaluaron las características morfológicas y tintoriales por Gram y 4’, 6-diamidino-2’-fenilindol, dihidrocloruro (DAPI) en el ciclo celular de Acinetobacter baumannii. A partir de cultivos sincrónicos de cuatro cepas de A. baumannii, se estudió el ciclo celular incubándolos en aerobiosis a 30ºC, tomando alícuotas cada 5 min por 2 h. A su vez, se realizaron los extendidos respectivos y se colorearon con Gram y DAPI para su posterior estudio microscópico. En el análisis estadístico se empleó la prueba de Fischer para asociar la reactividad tintorial por Gram y DAPI. En el 74% de los tiempos del ciclo, predominó la forma cocoide y la coloración Gram negativa de fuerte intensidad fue del 67%. Al determinar la media y la desviación estándar de los valores morfométricos bacterianos, se observó que entre cada 15 y 55 min la bacteria inicia un nuevo ciclo celular, disminuyendo su diámetro y longitud. Hubo asociación de manera estadísticamente significativa (p < 0,05) entre el aspecto laxo y compacto del material morado redondo del citoplasma con la fluorescencia ligera e intensa, respectivamente; así mismo, entre el carácter Gram positivo fuerte y la fluorescencia intensa. Se concluye que en la reacción Gram positiva, participe posiblemente el ADN y que el material morado de aspecto laxo y compacto observado por Gram en el citoplasma bacteriano corresponde al nucleoide y los cambios morfológicos obedecen al proceso mismo de crecimiento celular, pudiendo ser estos hallazgos un aporte para explicar el mecanismo de la tinción de Gram y su variabilidad, así como el pleomorfismo que presenta este género bacteriano.

Palabras clave: ADN, cocoide, fluorescencia, nucleoide.

ABSTRACT

Several studies have reported variations in bacterial staining by Gram, which are associated with the content of nucleic acids in the bacterial cell cycle. In order to give continuity to the microscopical studies pertaining to the bacterial cell cycle, the morphological and staining characteristics were evaluated by Gram and 4', 6-diamidino-2'-phenylindole, dihydrochloride (DAPI) in the cell cycle of Acinetobacter baumannii. From the synchronic cultures of 4 strains of A. baumannii, the cell cycle was studied incubating them in aerobiosis at 30ºC, taking aliquots every 5 min for 2 h. In turn, the respective extensions were made and stained with Gram and DAPI for their posterior microscopical study. In the statistical analysis Fischer's test was used to associate morphological and the staining characteristics by Gram and DAPI. In 74% of cycle times, the cocoid form predominated and 67% in the negative Gram staining. When determining the mean and standard deviation of bacterial morphological values, it was observed that between 15 and 55 min the bacterium initiates a new cell cycle, decreasing its diameter and length. There was a statistically significant association (p < 0.05) between the lax and compact appearance of the material with the light and intense fluorescent, respectively; likewise, between the strong Gram positive character and the intense fluorescence. It is concluded that in the Gram positive reaction, the DNA is possibly involved and that the purple material of compact and lax aspect observed by Gram staining in the bacterial cytoplasm correspond to the nucleoid and the morphological changes obey to the cellular growth process. These findings contribute to explain the mechanism of Gram staining, as well as its variability and the pleomorphism observed in this bacterial genus.

Key words: DNA, cocoide, fluorescence, nucleoide.