Extracción y cuantificación de ADN de pajillas de semen bovino criopreservado | Extraction and quantification of DNA bovine of straws semen criopreserved
Resumen
El semen criopreservado viene diluido con Tris, ácido cítrico, fructosa, glicerol, leche descremada en polvo y yema de huevo. Para extraer el ADN del semen es necesario eliminar el ADN exógeno, esto no se logra con las técnicas normales de extracción con semen fresco, por lo que es necesario recurrir a las técnicas forenses. El objetivo del presente estudio fue evaluar tres protocolos para la extracción de ADN de semen bovino criopreservado. El estudio se realizó en el laboratorio de fitopatología vegetal del Colegio de Postgraduados. Se utilizaron pajillas de ½ mL y ¼ mL. Las variables evaluadas fueron; Tiempo de ejecución del protocolo (T), pureza del ADN y concentración de ADN. Las técnicas evaluadas fueron: Tratamiento1: Yoshida et al. (1995). Tratamiento2: Penacino (1997). Tratamiento3: Técnica rápida de Penacino (1997). El
menor tiempo para ejecución del protocolo fue para el tratamiento tres con 100 minutos. Los carriles 1 al 4 y 7 al 10, se observa la presencia de proteína. Cuando se utilizaron una o dos pajillas de ¼ mL se observa poca proteína y mejor calidad del ADN. En carriles del uno al 10, los valores de la relación A260/A280 son inferiores 0.1. Los carriles 12 y 17 presentan valores cercanos al rango de pureza. Se concluye que para la extracción de ADN de semen bovino criopreservado se debe
utilizar una pajilla de ¼ mL por muestra con la técnica Penacino (1997), y dos pajillas de ¼ mL por muestra para la técnica rápida Penacino (1997).
Palabras clave: Semen, toros, criopreservado, extracción, ADN
ABSTRACT
The semen criopreserved comes diluted with tris, citric acid, fructose, glicerol, milk skimmed in powder and yolk of egg. To extract the DNA of the semen it is necessary to eliminate the ADN exogen, this is not achieved with the normal technique of extraction with fresh semen, for what it is necessary to resort to the forensic techniques. The objective of the present study was to evaluate three protocols for DNA's extraction of bovine semen criopreserved. The study was realized in the laboratory of vegetable fitopatology of Colegio de Postgraduados. They were in use straws of ½ mL and ¼ mL. The evaluated variables were; Time of execution of the protocol (T), purity of the DNA and DNA's concentration. The evaluated techniques were: Treatment1: Yoshida et al. (1995). Treatment2: Penacino (1997). Treatment3: Penacino (1997)'s rapid
Technique. The minor time for execution of the protocol was for the treatment three with 100 minutes. The rails 1 to 4 and 7 to 10, is observed the presence of protein. When one or two was in use straws of ¼ mL is observed few protein and better quality of the DNA. In rails of one to 10, the values of the relation A260/A280 are low 0.1. The rails 12 and 17 present values near to the range of purity. There concludes that for DNA's extraction of bovine semen criopreserved must use a
straw of ¼ mL for sample with the technique Penacino (1997), and two straws of ¼ mL for sample for the rapid technique Penacino (1997).
Key words: Semen, bulls, criopreserved, extraction, DNA
menor tiempo para ejecución del protocolo fue para el tratamiento tres con 100 minutos. Los carriles 1 al 4 y 7 al 10, se observa la presencia de proteína. Cuando se utilizaron una o dos pajillas de ¼ mL se observa poca proteína y mejor calidad del ADN. En carriles del uno al 10, los valores de la relación A260/A280 son inferiores 0.1. Los carriles 12 y 17 presentan valores cercanos al rango de pureza. Se concluye que para la extracción de ADN de semen bovino criopreservado se debe
utilizar una pajilla de ¼ mL por muestra con la técnica Penacino (1997), y dos pajillas de ¼ mL por muestra para la técnica rápida Penacino (1997).
Palabras clave: Semen, toros, criopreservado, extracción, ADN
ABSTRACT
The semen criopreserved comes diluted with tris, citric acid, fructose, glicerol, milk skimmed in powder and yolk of egg. To extract the DNA of the semen it is necessary to eliminate the ADN exogen, this is not achieved with the normal technique of extraction with fresh semen, for what it is necessary to resort to the forensic techniques. The objective of the present study was to evaluate three protocols for DNA's extraction of bovine semen criopreserved. The study was realized in the laboratory of vegetable fitopatology of Colegio de Postgraduados. They were in use straws of ½ mL and ¼ mL. The evaluated variables were; Time of execution of the protocol (T), purity of the DNA and DNA's concentration. The evaluated techniques were: Treatment1: Yoshida et al. (1995). Treatment2: Penacino (1997). Treatment3: Penacino (1997)'s rapid
Technique. The minor time for execution of the protocol was for the treatment three with 100 minutes. The rails 1 to 4 and 7 to 10, is observed the presence of protein. When one or two was in use straws of ¼ mL is observed few protein and better quality of the DNA. In rails of one to 10, the values of the relation A260/A280 are low 0.1. The rails 12 and 17 present values near to the range of purity. There concludes that for DNA's extraction of bovine semen criopreserved must use a
straw of ¼ mL for sample with the technique Penacino (1997), and two straws of ¼ mL for sample for the rapid technique Penacino (1997).
Key words: Semen, bulls, criopreserved, extraction, DNA
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